真武湯配方顆?；瘜W成分研究
真武湯出自《傷寒論》，藥物組成為：茯苓三錢9g芍藥三錢9g白術二錢6g生姜三錢9g附子炮去皮
，一枚，破八片9g。具有溫陽利水的功效，主治脾腎陽虛，水氣內停證。小便不利，四肢沉重疼痛，
腹痛下利，或肢體浮腫，苔白不渴，脈沉；太陽病發汗過多，陽虛水泛。汗出不解，其人仍發熱，
心下悸，頭眩，身瞤動，振振欲擗地。過量服用會有毒性反應，臨床中偶有口干、便結，孕婦忌服。
本次實驗以高效液相色譜法，對真武湯配方顆粒中的有效成分進行定性然后定量。本實驗旨在為
真武湯配方顆粒的質量標準建立提供參考。
 
1. 材料
1.1儀器+輔助工具
    waters 2695型HPLC儀，包括2966二極管陣列檢測器、Empower3色譜工作站；賽多利斯萬分之
一天平（賽多利斯科學儀器有限公司）；0.45μm濾頭，注射器（匹配0.45μm濾頭），500ml燒杯，
玻璃攪拌棒，容量瓶。
1.2藥品與試劑
    對照品：5-羥甲基糠醛，沒食子酸，芍藥內酯苷，芍藥苷，苯甲酸，苯甲酰新烏頭原堿，苯甲酰
烏頭原堿，6-姜酚，白術內酯III，均購買于成都埃法生物科技有限公司，采用面積歸一化法檢測純
度均大于98％。乙腈為色譜純，三乙胺，磷酸，均為分析純，水為怡寶純凈水（4.5L）。
 1.3原料
一方制藥-中藥配方顆粒一劑包括：生姜3包（0.5g/包），茯苓1包（0.5g/包），麩炒白術1包
（3.0g/包），白芍1包（1.0g/包），淡附片配方顆粒（0.7g/包）。（相當于臨床使用藥材生姜9g，
茯苓10g，麩炒白術10g，白芍10g，淡附片6g）
 
2. 方法與結果
2.1色譜條件
色譜柱：月旭C18色譜柱 4.5mm*250mm*5μm；流動相：A：乙腈，B：0.1%磷酸水+0.1%三乙胺水，
（梯度洗脫：0-5min，A：5%，5-25min，A：5%-17%，25-70min，A：17%-65%，70-75min，
A：65%，75-76min，A：65%-90%，76-90min，A：90%，90-92min，A：90%-5%，92-100min，A：5%）。
檢測波長（定量用波長）：5-羥甲基糠醛，沒食子酸，6-姜酚均用280nm；芍藥苷，芍藥內酯苷，苯甲酸，
苯甲酰新烏頭堿，苯甲酰烏頭原堿，均用230nm；白術內酯III用222nm。柱溫：35℃，流速：1.0mlmin。
 
2.2真武湯的制備
  取真武湯配方顆粒一劑，500ml燒杯一個，將一劑藥中每個小袋撕開倒入燒杯中，先加50ml沸水濕潤，
再加200ml沸水攪拌使顆粒溶化，放冷，過00.45μm針頭濾器，即得。
 
 2.3溶液配制
分別取，對照品沒食子酸，5-羥甲基糠醛，芍藥內酯苷，芍藥苷，苯甲酸，苯甲酰新烏頭原堿，苯甲酰烏頭原堿，
6-姜酚，白術內酯III（均購買于成都埃法生物），配制成濃度分別為0.14μg/μl， 0.044μg/μl， 0.056μg/μl
，0.164μg/μl，0.032μg/μl，0.012μg/μl， 0.002μg/μl，0.036μg/μl，0.00096μg/μl的混合對照液。
 
2.4系統適用性試驗
精密量取“2.3”項下混合對照品溶液適量，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，
記錄色譜圖。由圖1可知，在該色譜條件下， 各成分均能達到基線分離。


標記時間的峰依次分別為：沒食子酸，5-羥甲基糠醛，芍藥內酯苷，芍藥苷，苯甲酸，苯甲酰新烏頭原堿，苯甲酰烏頭原堿，6-姜酚，
白術內酯III）
2.5標準曲線繪制
 
沒食子酸：Y=446763x-77438   （R=1，n=5）
5-羥甲基糠醛：Y=291453x-64474  （R=1，n=5）
 
芍藥內酯苷：Y=82741x-12477  （R=0.9997，n=5）
 
芍藥苷：Y=306544x-474523  （R=0.999，n=5）
 
苯甲酸：Y=230965x-83997  （R=1，n=5）
 
苯甲酰新烏頭原堿：Y=35628x-493.81（R=0.9998，n=5）
 
苯甲酰烏頭原堿：Y=4611.4x+1409  （R=0.999，n=5）
 
6-姜酚：Y=24491x-5201.6 （R=0.9999，n=5）
 
白術內酯III :Y=2148x+2907.1 （R=0.9994，n=5）
2.6重復性試驗
9種物質保留時間RSD， n=5，
沒食子酸RSD=1.84%，5-羥甲基糠醛RSD=1.40%，芍藥內酯苷RSD=0.36%，芍藥苷RSD=0.29%，苯甲酸RSD=0.22%，
苯甲酰新烏頭原堿RSD=0.09%，苯甲酰烏頭原堿RSD=0.09%，6-姜酚RSD=0.07%，白術內酯IIIRSD=0.05%，表明儀器重現性良好。
2.7樣品含量計算

	標準方程	相關度	真武湯進樣 100μl 峰面積	計算X（體積 μL）	進樣濃度（μg/μl）	進樣質量μg	含量 μg/ml
沒食子酸	Y=446763x-77438	1	14353017	32.3	0.14	4.522	45.22
5-羥甲基糠醛	Y=291453x-64474	1	4827751	16.79	0.044	0.739	7.39
芍藥內酯苷	Y=82741x-12477	0.9997	9925475	120.11	0.056	6.726	67.26
芍藥苷	Y=306544x-474523	0.999	31523969	104.38	0.164	17.118	171.18
苯甲酸	Y=230965x-83997	1	6243645	27.4	0.032	0.877	8.77
苯甲酰新烏頭原堿230	Y=35628x-493.81	0.9998	969149	26.47	0.012	0.318	3.18
苯甲酰烏頭原堿  230	Y=4611.4x+1409	0.999	704830	152.54	0.002	0.305	3.05
6-姜酚	Y=24491x-5201.6	0.9999	88901	3.84	0.036	0.138	1.38
白術內酯III	Y=2148x+2907.1	0.9994	88769	39.97	0.00096	0.038	0.38

3討論
有研究認為，同時測定中藥復方中多個成分時，因 各成分的紫外最大吸收波長不同，因此需要采用波長切
換法測定各成分的含量。參考文獻在 190～400 nm 波長范圍內對 9 種待測成分進行全波長掃描，結果發現，
在233 nm波長處芍藥苷，芍藥內酯苷，苯甲酸，苯甲酰烏頭原堿，苯甲酰新烏頭原堿，有較大吸收，
222 nm波長處白術內酯III有最大吸收，280nm波長處5- 羥甲基糠醛，，有最大吸收，205nm，
272nm處沒食子酸有最大吸收，200nm，281nm處6-姜酚有最大吸收，考慮到部分成分含量較低，
因此在保證各待測成分檢測靈敏度及基線分離的情況下，本研究采用“2.1”項下波長作為檢測波長。
綜上所述，本研究所建定性（保留時間+紫外光譜比對）定量方法準確、專屬性好，可用于同時測定
真武湯中9種活性成分的含量。
附 標準曲線圖+紫外光譜圖